改进评估农产品中传染性人类肠道病毒存活的方法

巴塞罗那大学的研究人员在 2024 年食品安全中心（CPS）研究研讨会上展示了这项海报报告。
摘要
与食用叶类蔬菜和新鲜或冷冻浆果相关的常见致病病毒包括人类诺如病毒（HuNoV）和甲型肝炎病毒（HAV），它们分别可导致急性胃肠炎和肝炎。
由于缺乏直接的自动化方法，检测病毒污染仍然困难重重。此外，需要新的方法来确认已识别病毒基因组的感染性。项目总体目标是优化现有方法以提高效率、缩短周转时间，并评估病毒的感染性。这将涉及改进衣壳完整性分子分析并研究唾液腺连续细胞系用于检测传染性 HuNoV 的适用性。优化程序将用于深入理解传染性病毒如何在叶类蔬菜和浆果中持续存在，贯穿于收获后的储存和消毒过程。
目标
优化目前标准化的方法，从叶类蔬菜和浆果中回收传染性肠道病毒。
优化衣壳完整性分子分析，以更好地估计 HuNoV 和 HAV 的感染性。
研究不同收获后条件下，传染性病毒、衣壳保护基因组和总基因组在生菜和浆果中的持久性。
方法
在项目的第一个季度内，团队开发了两种广泛应用于该领域的替代病毒浓缩协议：氢氧化铝吸附沉淀法（AlCl3）和浓缩移液器 Select（CP, InnovaPrep）。这些方法的有效性与当前 FDA 和 ISO 参考协议进行了比较。从零售渠道获得的叶类蔬菜和草莓被接种了 10^5 个 HAV（pHM175 43c HAV）和 HuNoV GI.6 和 GII.4 基因当量 / 25 克产品。Mengovirus 作为过程控制病毒使用。
通过增加 RTqPCR 扩增子长度约四倍来评估 PMAxx 活性 RTqPCR 分析的性能提升，以最小化检测失活的 HAV（经受 5 分钟 99ºC 处理）。然后将其与 FDA 和 ISO RTqPCR 协议进行比较。
至今的结果
展示了病毒提取 / 浓缩程序和新型衣壳完整性 PMAxx 分析的方法特征。
评估了四种提取 / 浓缩方法从生菜和草莓中回收目标病毒的回收率。结果显示，在叶类蔬菜上，FDA 和浓缩移液器的回收率显著更高，所有三种病毒的平均回收率分别为 62.5%±18.9 和 77.6%±22.3。在草莓上，FDA、AlCl3 和浓缩移液器方法的表现优于 ISO，平均回收率分别为 38.8%±44.2、37.1%±26.8 和 35.6%±18.1。
总体而言，浓缩移液器方法在两种基质上均展现出较短的周转时间和令人满意的回收率。
结合 PMAxx 与基于长扩增子的新 RTqPCR 协议完全减少了非活性加热灭活 HAV 的检测，相比 ISO 和 FDA 协议而言。
对行业的益处
当前项目旨在为新鲜农产品加工行业提供以下益处：
提供优化的用户友好标准操作程序，用于从叶类蔬菜和浆果中检测和量化 HuNoV 和 HAV，具有较短的周转时间且不依赖超速离心设备。
提供一套优化的方法，以更好地估计受污染样本中的 HuNoV 感染性。
掌握收获后情景下叶类蔬菜和浆果中传染性 HuNoV 和 HAV 的死亡率，支持设计有效实践。
查看海报 - 改进评估农产品中传染性人类肠道病毒存活的方法，Guix 等，巴塞罗那大学肠道病毒实验室博士，2024